总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）试剂空白吸光度(空白吸光度)检测

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总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）试剂空白吸光度检测的背景与意义

总蛋白测定是临床生化检验中的常规项目，其检测结果对评估肝功能、营养状态及肾脏疾病具有重要意义。双缩脲法作为一种经典的蛋白定量方法，凭借其操作简便、特异性高和成本低廉的特点，在实验室中广泛应用。试剂空白吸光度（空白吸光度）是该方法质量控制的关键参数，反映了试剂本身的背景干扰水平。通过测定空白吸光度，可排除试剂中显色物质、杂质或保存条件变化对检测结果的干扰，确保检测数据的准确性和重复性。尤其在试剂批次更换或仪器校准过程中，空白吸光度的监测尤为重要。

检测项目与核心参数

试剂空白吸光度检测的核心目标是量化试剂本身在特定波长下的吸光值。主要关注以下参数：
1. 空白吸光度绝对值：在540nm波长下，试剂与去离子水混合后的吸光值，通常要求≤0.15（具体标准因试剂品牌而异）；
2. 批次间差异：不同生产批次的试剂空白吸光度波动范围；
3. 稳定性验证：试剂开封后随时间推移的空白吸光度变化趋势。

检测仪器与设备要求

检测过程需依赖仪器设备：
- 分光光度计：需具备540nm波长检测功能，光路系统需定期校准；
- 恒温孵育系统：控制反应温度于37±0.5℃（部分试剂要求室温反应）；
- 精密移液器：建议使用±1%精度的微量移液器；
- 比色皿：光径1cm的石英或光学玻璃比色皿，需无划痕、清洁无污染。

标准检测方法与操作流程

依据《WS/T 347-2011 双缩脲法测定血清总蛋白》标准，空白吸光度检测流程如下：
1. 试剂准备：将试剂恢复至室温，按说明书比例与去离子水混合；
2. 空白管设置：取3ml工作试剂加入比色皿，以去离子水为参比；
3. 仪器校准：预热分光光度计30分钟，测试前用参比液调零；
4. 吸光度测定：在540nm波长下连续读取3次吸光值，取均值作为终结果；
5. 数据记录：记录环境温度、试剂批号及仪器型号等关联信息。

质量标准与结果判读

根据行业规范，合格标准应满足：
- 基线吸光度：未加样本时吸光值应≤0.15（具体参考试剂说明书）；
- 重复性要求：同一试剂三次测定结果差异应＜±0.02；
- 异常处理：若空白吸光度超过阈值，需排查试剂变质、比色皿污染或仪器故障等因素。部分高灵敏度试剂可能要求更严格的≤0.10标准。

常见干扰因素与解决方案

实际检测中需注意：
- 试剂储存异常：避光不当可能导致显色剂分解，需检查试剂外观；
- 水质不合格：建议使用新鲜制备的超纯水（电阻率≥18.2MΩ·cm）；
- 仪器基线漂移：可通过重复调零或更换光源灯管进行校正；
- 操作误差：需严格统一比色皿装入液量（建议使用定量加样器）。