乳酸脱氢酶测定试剂盒（速率法）试剂空白吸光度(空白吸光度)检测

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乳酸脱氢酶测定试剂盒（速率法）试剂空白吸光度检测的重要性

乳酸脱氢酶（LDH）是临床生化检测中重要的酶类指标，广泛应用于心肌梗死、肝病、肿瘤等疾病的诊断与监测。在速率法检测中，试剂空白吸光度（Blank Absorbance）是评估试剂性能的核心参数之一，直接影响检测结果的准确性和重复性。试剂空白吸光度反映了试剂本身在特定波长下的吸光特性，其数值过高可能由试剂杂质、储存条件不当或配制误差引起，导致检测信号异常，进而影响LDH活性计算的可靠性。因此，试剂空白吸光度的检测是实验室质量控制的关键环节，需严格按照标准化流程进行。

检测项目与内容

试剂空白吸光度检测的核心目标是评估试剂体系本身的背景吸光值，确保其在规定范围内（通常≤0.3）。检测内容包括： 1. 试剂空白吸光度的绝对值：通过分光光度计直接测定试剂与稀释液混合后的吸光度； 2. 波长特异性验证：确认试剂在指定检测波长（如340nm）下的吸光稳定性； 3. 时间依赖性分析：观察试剂空白在反应时间内（如5分钟）的吸光变化，确保无明显漂移。

检测仪器与设备

试剂空白吸光度检测需使用以下仪器： 1. 分光光度计：需具备高精度波长校准功能（±1nm误差内），并支持动力学检测模式； 2. 恒温水浴槽或温控系统：确保反应温度控制在37±0.5℃； 3. 微量移液器：精度需达到±1%（如10-100μL规格）； 4. 离心机：用于试剂混合前的均匀化处理。

检测方法与步骤

具体检测流程如下： 1. 试剂准备：将试剂盒中的R1与R2按说明书比例复溶，静置平衡至室温； 2. 混合与离心：取适量试剂于离心管中，3000rpm离心5分钟去除沉淀； 3. 吸光度测定： - 设置分光光度计波长至340nm（NADH特征吸收峰）； - 以去离子水为参比，读取试剂空白吸光度初始值（A0）； - 在37℃条件下连续监测5分钟，记录每分钟吸光度变化（ΔA/min）； 4. 数据计算：取反应线性期（通常第2-4分钟）的ΔA均值，结合试剂体积与光程计算终空白值。

检测标准与质量控制

试剂空白吸光度的判定需符合以下标准： 1. 行业规范：参照《WS/T 345-2011 血清乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法》； 2. 空白值限值：340nm波长下，空白吸光度≤0.3（光程10mm）； 3. 批间差异控制：同一批次试剂空白差异应＜5%，不同批次间差异＜10%； 4. 影响因素验证：需排除血红蛋白（＜0.5g/L）、胆红素（＜342μmol/L）等干扰物的影响。

结论

试剂空白吸光度检测是确保乳酸脱氢酶测定试剂盒性能的重要环节。通过规范化的检测流程、的仪器校准及严格的质量控制标准，可有效降低试剂背景干扰，提升LDH活性检测的准确性。实验室需定期重复验证试剂空白值，并结合质控品进行全过程监控，以保障临床检测结果的可靠性。