生物负载的测定方法和微生物鉴定方法检测

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生物负载测定与微生物鉴定方法概述

生物负载（Bioburden）是指产品、原材料或生产环境中存在的活性微生物总量，其测定是药品、医疗器械、食品及化妆品等行业的必检项目。通过生物负载检测，可评估微生物污染水平并为灭菌工艺验证提供依据。而微生物鉴定则是在检测到微生物后，进一步确定其种属和特性，对污染溯源、风险评估和质量控制具有重要意义。两种检测的结合能够全面评估微生物风险，保障产品安全性和工艺稳定性。

一、生物负载的检测项目与仪器

检测项目：生物负载检测主要包括总需氧菌计数、霉菌和酵母菌计数、耐热菌（如芽孢杆菌）检测等。部分特殊产品需增加厌氧菌或特定致病菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）筛查。

检测仪器： 1. 恒温培养箱：用于微生物的标准化培养（如30-35℃需氧菌培养，20-25℃霉菌培养）； 2. 菌落计数器：辅助人工或自动统计平皿菌落数量； 3. 薄膜过滤装置：适用于液体样品的微生物富集； 4. ATP生物发光仪：快速检测微生物活性（适用于实时监测）。

二、生物负载的检测方法与标准

1. 平皿计数法（倾注法/涂布法）： 将样品溶液接种至琼脂培养基，培养后统计菌落形成单位（CFU）。此方法符合ISO 11737-1:2018和《中国药典》通则1105要求，适用于大多数非抑菌性样品。

2. 薄膜过滤法： 通过0.45μm滤膜截留微生物，转移至培养基培养，适用于大体积样品或含抑菌成分的液体（如注射剂）。操作需遵循ISO 11737-2:2019标准。

3. 大可能数法（MPN）： 基于统计学原理的液体梯度稀释法，常用于低生物负载样品检测，参考标准为ISO 4833-1:2013。

三、微生物鉴定方法与技术

1. 表型鉴定法： • 生化反应鉴定：使用API条或VITEK系统，通过代谢特征判断菌种（如氧化酶试验、糖发酵试验）； • 质谱技术：MALDI-TOF MS通过蛋白质图谱快速鉴定微生物，符合CLSI M58:2021指南。

2. 基因型鉴定法： • 16S rRNA/ITS测序：针对细菌和真菌的保守基因区域进行PCR扩增与测序，比对数据库确定种属； • 全基因组测序（WGS）：适用于高精度鉴定和溯源分析，参考标准为ISO/TS 21396:2017。

四、检测标准与法规要求

• 生物负载测定：ISO 11737系列、USP<61>、EP 2.6.12； • 微生物鉴定：ISO 11133:2014（培养基质量控制）、FDA《微生物鉴定指南》； • 医疗器械行业需额外符合ISO 13408-1:2023的工艺验证要求。

提示：检测方法的选择需结合样品特性、检测目的及法规要求，复杂样品建议采用多种方法交叉验证。