MTT试验和LDH试验检测

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MTT试验与LDH试验概述

MTT试验（甲基噻唑基四唑法）和LDH试验（乳酸脱氢酶释放法）是细胞生物学与毒理学研究中常用的两种检测方法，广泛应用于细胞活性评估、药物筛选、毒性测试及细胞损伤机制研究等领域。MTT试验通过检测线粒体脱氢酶活性间接反映细胞增殖或存活状态，而LDH试验则通过测定细胞培养液中乳酸脱氢酶的释放量评估细胞膜的完整性及坏死程度。两者在实验设计、检测对象及应用场景上具有互补性，共同为细胞功能研究提供关键数据支持。

检测项目及原理

MTT试验：主要用于检测细胞增殖、抑制或毒性效应。MTT试剂被活细胞线粒体中的脱氢酶还原为紫色甲瓒结晶，其溶解后的吸光度值与活细胞数量呈正相关。
LDH试验：用于评估细胞膜损伤或坏死。细胞受损时，胞内LDH释放至培养液，通过催化底物反应生成有色产物，吸光度变化反映LDH释放量。

检测仪器与设备

1. MTT试验：酶标仪（450-570 nm波长）、CO₂培养箱、离心机、微量移液器等。
2. LDH试验：酶标仪（490 nm波长）、分光光度计、高速离心机、恒温振荡器等。

检测方法步骤

MTT试验标准流程：
（1）细胞接种于96孔板，实验处理后加入MTT试剂孵育4小时；
（2）弃上清，加入DMSO或异丙醇溶解甲瓒结晶；
（3）酶标仪测定吸光度，计算细胞存活率。

LDH试验关键步骤：
（1）收集细胞培养上清液，离心去除碎片；
（2）加入LDH底物反应液，避光孵育30分钟；
（3）终止反应后测定490 nm吸光度，对比标准曲线定量LDH释放量。

检测标准与规范

1. 标准：参考ISO 10993-5医疗器械生物相容性评价中细胞毒性试验规范。
2. 行业指南：美国药典（USP）及ICH指导原则对药物筛选试验的重复性要求。
3. 质量控质：需设置空白对照、阳性对照（如Triton X-100处理组）及复孔检测，确保数据可靠性。MTT试验建议吸光度值在0.1-2.0范围内，LDH试验需校正血清中LDH本底值。

两种方法需根据实验目的选择：MTT适用于长期毒性评估，而LDH更适用于急性损伤检测。通过标准化操作与交叉验证，可显著提升实验结果的科学性与可比性。