中成药、中药材及其饮片展青霉素检测

发布时间：2026-10-23 作者：中析研究所浏览：

展青霉素又称棒曲霉毒素，是由扩展青霉、曲霉属等真菌产生的次级代谢产物，具有潜在毒性，可污染果实类中药材及相关中成药原料。本文围绕中成药、中药材及其饮片中的展青霉素检测，依次介绍检测原理与机制、样品制备与前处理、HPLC法含量测定、LC-MS/MS确证检测、方法学性能指标以及限量判定与适用场景，为相关质量控制工作提供系统的方法参考。

检测原理与机制

展青霉素分子结构中含有内酯环与共轭双键体系，在紫外区具有特征吸收，据此可采用液相色谱法配合紫外检测器进行定量分析。该化合物极性居中，可溶于水、甲醇、乙酸乙酯等溶剂，这一性质构成提取与净化环节的基础。确证检测环节依托质谱技术，以母离子与特征碎片离子的离子对关系进行定性判断，可排除基质中干扰组分引起的假阳性信号。免疫亲和柱净化基于抗体与展青霉素的特异性结合反应，用于从复杂提取液中定向吸附目标物，再经溶剂洗脱后进入仪器分析。

样品制备与前处理

样品制备环节包含粉碎、提取、净化与浓缩等步骤。中药材及饮片样品经充分粉碎混匀后，称取适量试样，以乙酸乙酯或含水甲醇体系进行振荡提取，使目标物从基质中充分溶出。提取液经离心分离后取上清液，多数操作流程采用免疫亲和柱进行净化，先以缓冲液平衡柱体，上样后以淋洗液去除杂质，再以甲醇洗脱目标物。洗脱液经氮气吹干后以流动相复溶，经微孔滤膜过滤，供色谱分析使用。中成药制剂因辅料组成复杂，必要时可增加脱脂或除糖处理，以降低基质干扰。

HPLC法测定展青霉素含量

液相色谱法为中成药、中药材及饮片中展青霉素测定的常规手段。色谱分离通常选用反相C18色谱柱，以水与乙腈或甲醇组成流动相进行等度洗脱，紫外检测波长一般设定在展青霉素的大吸收附近。分析时依次进样标准系列溶液与样品溶液，以保留时间定位目标色谱峰，以外标法校准曲线计算样品含量。操作中应关注色谱峰的峰形与分离度，若相邻杂质峰干扰目标峰积分，需调整洗脱比例或优化净化条件。含糖量高或色素含量高的样品易出现基线漂移，应强化前处理净化后再行测定。

LC-MS/MS确证检测

液相色谱-串联质谱法用于阳性结果的确证分析，尤其适用于基质复杂、色谱峰存疑的样品。该技术在HPLC分离基础上，以三重四极杆质谱进行多反应监测，选取展青霉素的母离子及两对以上特征离子对同时监测，依据离子对响应比值与保留时间共同判定。样品分析时应随行空白对照与加标对照，以评价基质效应并校准回收水平。离子源通常选用电喷雾模式，流动相中可适量加入挥发性添加剂以改善离子化效率。确证结果与HPLC定量数据相互印证，可提高结论的可靠性。

方法学性能指标

方法学评价涵盖专属性、线性范围、检出限、定量限、精密度、准确度与回收率等维度。专属性考察空白基质对目标物测定有无干扰；线性范围以标准曲线相关系数衡量，应覆盖预期含量水平；检出限与定量限分别反映方法可检出与可准确定量的下限水平。精密度以重复性与重现性表示，一般以多次测定结果的相对标准偏差评价；准确度以加标回收试验评价，回收水平应在方法可接受区间内。稳定性考察涵盖标准溶液与样品溶液在放置期间的响应变化。各项指标满足方法验证要求后，方可用于常规检验。

限量判定与适用场景

展青霉素限量判定应依据现行有效的药品标准或相关技术要求执行，检验机构通常结合标准限度对测定结果进行区间判定，同时考虑测量不确定度的影响。该检测适用于果实类、种子类等易受真菌污染的中药材及其饮片，如以霉变风险较高的植物果实为原料的品种，以及相应中成药制剂的原料验收与成品放行检验。在贮藏环节受潮、包装破损或久贮的产品，亦应纳入监控范围。生产企业可将该指标纳入原料入厂检验与周期性风险评估，监管部门则将其作为真菌毒素类有害物质监控的项目之一。