碳酸饮料志贺氏菌检测

发布时间：2026-10-15 作者：中析研究所浏览：

碳酸饮料是以水为基础原料，经甜味剂、酸味剂、香精及二氧化碳充气加工而成的即饮类饮品。由于其生产环节涉及糖浆调配、水处理与灌装封盖，一旦水源或设备受粪便污染，志贺氏菌即可能进入成品。本文围绕碳酸饮料志贺氏菌检测，依次阐述检测原理与机制、样品采集与制备、国标培养法流程、PCR快速检测、ELISA初筛与生化鉴定，以及检测性能指标与判定标准，为生产质量控制与安全评估提供方法参照。

检测原理与机制

志贺氏菌属肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，属于肠道致病菌，可在厌氧或兼性厌氧条件下生长繁殖。检测机制依托其生物学特性分层展开：首先利用增菌培养基抑制杂菌并促进目标菌繁殖；继而在选择性分离平板上呈现典型菌落形态；随后经生化反应图谱与血清学凝集试验完成菌属及血清型确认。分子检测则以志贺氏菌特异性基因片段为靶标，经核酸扩增后依据扩增产物判定。免疫学方法依据抗原抗体特异性结合原理，用于初筛与辅助鉴定。

样品采集与制备

碳酸饮料样品应在无菌操作条件下采集，盛装于灭菌容器并注明批次信息，冷链条件下尽快送检。检测前需对样品进行脱气处理：将样品倒入无菌容器，轻微振荡或超声排气，使二氧化碳充分逸出，避免气体干扰后续稀释与接种操作。制备时以无菌磷酸盐缓冲液或生理盐水对样品做梯度稀释，混匀后吸取规定体积接入增菌培养基。脱气过程应防止外界微生物污染，所有操作在洁净环境下进行，并同步设置空白对照以监控制备环节的无菌状态。

国标培养法检测流程

培养法为国标规定的基准方法。样品经脱气稀释后接入志贺氏菌增菌液，于规定温度下增菌培养一段时间，使受损或数量稀少的目标菌恢复生长。增菌液划线接种于强选择性与弱选择性两类分离平板，培养后观察菌落形态：志贺氏菌在相应平板上通常呈无色半透明、光滑湿润的菌落。自每块平板挑取可疑菌落转接三糖铁琼脂斜面与营养琼脂，观察斜面与底层的颜色及产气、产硫化氢情况，初步判定菌属倾向，再进入系统生化与血清学鉴定环节。

PCR快速检测方法

PCR方法以志贺氏菌保守特异性基因序列为扩增靶标，可在数小时内给出定性结果，适用于大批量样品的快速筛查与污染溯源。操作流程：取增菌培养物离心集菌，采用煮沸法或商品化试剂盒提取基因组DNA；以特异性引物与扩增试剂配制反应体系，置于实时荧光PCR仪或常规PCR仪运行扩增程序；荧光法依据扩增曲线与循环阈值判定，常规法则经凝胶电泳比对预期条带。检测须同步设置阳性对照、阴性对照与空白对照，防止扩增污染导致假阳性。阳性结果建议经培养法复核确认。

ELISA初筛与生化鉴定

ELISA方法将志贺氏菌特异性抗体包被于微孔板固相载体，加入样品增菌液后，目标菌抗原与固相抗体结合，经酶标二抗显色，依据吸光度与临界值比较判定阴阳性。该法通量高、操作相对简便，适用于生产线批量样品的初筛，阳性样品需转入生化鉴定复核。生化鉴定将纯培养物接种于系列生化试验管或自动化鉴定系统试剂条，考察葡萄糖发酵、乳糖分解、硫化氢产生、吲哚试验、赖氨酸脱羧及动力等反应，结合血清学玻片凝集试验判定菌属与血清型，形成完整鉴定链条。

检测性能指标与判定标准

培养法作为基准方法，具有菌落形态直观、可分离活菌并进一步分型的优势，但周期较长；PCR灵敏度高、检测快速，但无法区分死菌与活菌，结果需培养法确证；ELISA通量高，特异性与灵敏度受抗体质量制约，通常定位为初筛手段。判定依据食品安全标准中碳酸饮料致病菌限量规定执行：在规定检验量内检出志贺氏菌即判定为不合格，报告以每份样品检出与否表述。检测过程须记录增菌条件、平板菌落特征、生化谱及血清凝集结果，保证结果可追溯、可复核。